操作方法：對潔凈車(chē)間用食品廠(chǎng)臭氧機{車(chē)間臭氧機}滅菌1小時(shí)后進(jìn)行沉降菌檢測

名稱(chēng)：潔凈區微生物檢測操作規程

關(guān)鍵詞：潔凈區、微生物檢測、食品廠(chǎng)臭氧機、車(chē)間臭氧機

目 的：尋得優(yōu)質(zhì)食品廠(chǎng)臭氧機、車(chē)間臭氧機廠(chǎng)家 并規范潔凈區微生物檢測

背景知識：略

原理：空氣源風(fēng)冷臭氧滅菌

適用范圍：100級、1萬(wàn)、10萬(wàn)、30萬(wàn)級潔凈區環(huán)境。

1.         沉降菌檢測

1)        在萬(wàn)級潔凈區內的關(guān)鍵操作點(diǎn)和潔凈室內每周檢測一次沉降菌和浮游菌；在10萬(wàn)級潔凈區內其檢測頻次為每月檢測一次。30萬(wàn)級每季度檢測一次沉降菌。

2)        由微生物檢測員按《養基的配制操作規程的要求配制肉湯瓊脂培養基，培養皿使用Φ90mm×15mm，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。

3)        做好潔凈區消毒工作，開(kāi)啟潔凈區凈化空調系統，正常運行不少于30分鐘；對單向流如100級的凈化工作臺和層流罩要在凈化系統運行10min后開(kāi)始。

4)        靜態(tài)測試在除測試人員外，室內無(wú)生產(chǎn)人員的情況下進(jìn)行，動(dòng)態(tài)測試在已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行。

5)        采樣點(diǎn)布置選用對角線(xiàn)法，要求布置地面四個(gè)方向，工作線(xiàn)上左右，關(guān)鍵設備頂上放置一個(gè)。

6)        萬(wàn)級、10萬(wàn)級、30萬(wàn)級的最少采樣點(diǎn)數可按下表確定。

在滿(mǎn)足最少測點(diǎn)數的同時(shí)，還宜滿(mǎn)足最少培養皿數，見(jiàn)下表

7)        百級區只有凈化工作臺下的局部范圍，其面積小于10m2，因此百級區取樣點(diǎn)至少為3個(gè)。

8)        測試人員按潔凈室級別規定的程序更換潔凈服進(jìn)入潔凈區；靜態(tài)測試時(shí)，室內人員不得多于2人。

9)        將制備好的肉湯瓊脂培養基按采樣點(diǎn)布點(diǎn)位置離地0.8～1.5m處放置，打開(kāi)培養皿蓋，暴露30分鐘，檢測人員及時(shí)填寫(xiě)記錄，記錄房間溫濕度，壓差及測試狀態(tài)。

10)     蓋好皿蓋，將培養皿倒置于恒溫培養箱內，在30～35℃中培養48小時(shí)，并用3只培養皿作對照。

11)     用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察平皿上所有菌落數，要注意菌落與培養基沉淀物的區別，然后用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。

12)     計算平均菌落數 =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號培養皿菌落數，M2：2號培養皿菌落數，n： 培養皿數。

13)     用平均菌落數判斷潔凈室空氣中的微生物， 潔凈區的平均菌落數（靜態(tài)測試）：100級≤1個(gè)/皿，萬(wàn)級≤3個(gè)／皿，10萬(wàn)級≤10個(gè)／皿，30萬(wàn)級≤15個(gè)／皿。

14)     如超過(guò)標準，則必須對此區域重新消毒，重新采樣兩次，測試結果均須合格；否則要向質(zhì)量管理部經(jīng)理通報，并采取相應的措施。

15)     檢測人員必須向QA部門(mén)發(fā)“潔凈級別檢測記錄”，取樣和微生物培養及檢測人員均要在記錄上簽名，QA部門(mén)主管審核，記錄由質(zhì)量管理部保存三年。

2.         浮游菌檢測

1)        對萬(wàn)級和10萬(wàn)級潔凈區要進(jìn)行浮游菌的檢測，在萬(wàn)級區內的關(guān)鍵操作點(diǎn)和潔凈室內每周檢測一次，10萬(wàn)級潔凈區內其檢測頻次為每月檢測一次。

2)        浮游菌取樣使用浮游菌采樣器，采樣器必須要有流量計和定時(shí)量，并按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數據的可靠性。

3)        采樣器進(jìn)入被測房間前要先用消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器最好是一直放在房間內；采樣時(shí)使用規定為Φ150mm×15mm培養皿。

4)        由微生物檢測人員按《培養基的配制操作規程》的要求配制營(yíng)養瓊脂培養基，于121℃濕熱滅菌20分鐘，取出備用。

5)        浮游菌取樣與沉降菌一樣可分為靜態(tài)測試和動(dòng)態(tài)測試兩種狀態(tài)；各種潔凈度的采樣點(diǎn)數目和最小采樣量如下表所示。

浮游菌取樣點(diǎn)數目及最小采樣量

6)        采樣點(diǎn)布點(diǎn)位置離地0.8～1.5m處放置，送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右；可在關(guān)鍵設備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍增加測點(diǎn)；采樣點(diǎn)的布置與5)相同。

7)        對單向流如l00級凈化工作臺，測試要在凈化空調系統正常運行不少于l0min后開(kāi)始；對非單向流，如緩沖室、培養室，測試要在凈化空調系統正常運行不少于30min后開(kāi)始。

8)        采樣者必須穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤(pán)上放入或調換培養皿前，雙手要用消毒劑消毒；培養皿表面必須嚴格消毒。

9)        采樣口及采樣管在使用前必須高溫滅菌，要用消毒劑消毒采樣器的頂盤(pán)，轉盤(pán)以及罩子的內外面；對采樣管的外壁和內壁進(jìn)行消毒后，要將管中的殘留液倒掉并晾干。

10)     儀器經(jīng)消毒后先不放入培養皿，先接通電源，啟動(dòng)真空抽氣泵抽氣不少于5min，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)。

11)     調好流量，轉盤(pán)轉速，已知采樣器的流量（L/min ），設定采樣時(shí)間(min)，相乘即采樣量(L)；關(guān)閉真空泵。

12)     檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，培養基及培養皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用，放入培養皿，蓋上蓋子后調節采樣器縫隙高度。

13)     對于單向流或逆風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向，對于非單向流采樣管口向上，布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應離開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口lm以上。

14)     除百級區外，在其他潔凈室采樣時(shí)，要在送風(fēng)口和關(guān)鍵部位各進(jìn)行一次采樣，每個(gè)采樣點(diǎn)只采樣一次。

15)     置采樣口于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟采樣器，采樣時(shí)，測試人員要站在采樣口的下風(fēng)側，靜態(tài)測試時(shí)，室內人員不得多于2人。

16)     采樣結束后取出培養皿，蓋上皿蓋并編號，注意防止采樣管對樣本的污染；要用消毒劑噴射罩子的內壁和轉盤(pán)，將采樣過(guò)程記錄在“潔凈級別檢測記錄”上。

17)     全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中30℃~35℃培養48h；每批培養基可選3只培養皿作對照培養，檢驗培養基本身是否污染。

18)     用肉眼直接計數，標記或菌落計數器上點(diǎn)計，然后用500倍放大鏡檢查，有否遺漏，若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。

19)     浮游菌評定標準：100級≤5/m3，萬(wàn)級≤100/m3，10萬(wàn)級≤500/m3

20)     微生物檢測人在“潔凈級別檢測記錄”上記錄檢測數據，并交QA部門(mén)主管審批，每個(gè)測點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于設定的潔凈度標準的規定。

21)     若某測點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過(guò)評定標準，則必須對此區域先行消毒，然后重新取樣兩次，兩次測試結果必須合格；否則要向質(zhì)量管理部經(jīng)理通報，并要采取相應的措施。

車(chē)間凈化無(wú)菌級別請參照國家消毒標準。